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分光光度計的原理

来源:/   作者:紫外可見分光光度計    更新日期:2017-06-09 08:56:58    点击:2952

分光光度計的原理


分光光度計,又称光谱仪(spectrometer),是将成分复杂的光,分解为光谱线的科学仪器。测量范围一般包括波长范围为380~780 nm的可见光区和波长范围为200~380 nm的紫外光区。不同的光源都有其特有的发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源。钨灯的发射光谱:钨灯光源所发出的380~780nm波长的光谱光通过三棱镜折射后,可得到由红、橙、黄、绿、蓝、靛、紫组成的连续色谱;该色谱可作为可见光分光光度計的光源。

 

 

 

一、基本簡介

 

1、光度定義

分光光度法是通過測定被測物質在特定波長處或一定波長範圍內光的吸收度,對該物質進行定性和定量分析。常用的波長範圍爲:(1)200~400nm的紫外光區(2)400~760nm的可見光區,(3)2.5~25μm(按波數計爲4000cm<-1>~400cm<-1>)的紅外光區。所用儀器爲紫外分光光度計、可见光分光光度計(或比色计)、红外分光光度計或原子吸收分光光度計。为保证测量的精密度和准确度,所有仪器应按照国家计量检定规程或本附录规定,定期进行校正检定。

紫外分光光度計与可见光分光光度計的区别

紫外可見分光光度計与可见分光光度計的区别是測定波長範圍不同,紫外一般用氫燈,測定波長範圍180~350nm,可見一般用鎢燈,測定波長範圍320~1000nm。

所謂紫外可見分光光度計也就是说这个仪器可以更换光源,能够测定吸收峰在紫外和可见光部分的化合物。发现吸光度超过2,便不再显示,是正常现象。吸光度是透光率的负对数,吸光度超过2就是说透光率小于1%,低于仪器的检出限,就不再显示了。至于能不能用分光光度計,取决于你测定的波长。


2、儀器組成

分光光度計已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸,蛋白。

定量以及細菌生長濃度的定量。

儀器主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、信號處理器和顯示與存儲系統組成。


3、光譜範圍

包括波长范围为400~760 nm的可见光区和波长范围为200~400 nm的紫外光区.不同的光源都有其特有的发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源.

钨灯的发射光谱:钨灯光源所发出的400~760nm波长的光谱光通过三棱镜折射后,可得到由红橙,黄绿,蓝靛,紫组成的连续色谱;该色谱可作为可见光分光光度計的光源.

氢灯(或氘灯)的发射光谱:氢灯能发出185~400 nm波长的光谱可作为紫外光光度计的光源.


物質的吸收光譜(1)

如果在光源和棱鏡之間放上某種物質的溶液,此時在屏上所顯示的光譜已不再是光源的光譜,它出現了幾條暗線,即光源發射光譜中某些波長的光因溶液吸收而消失,這種被溶液吸收後的光譜稱爲該溶液的吸收光譜.

不同物質的吸收光譜是不同的.因此根據吸收光譜,可以鑒別溶液中所含的物質.

物質的吸收光譜(2)

當光線通過某種物質的溶液時透過的光的強度減弱.因爲有一部分光在溶液的表面反射或分散,一部分光被組成此溶液的物質所吸收只有一部分光可透過溶液.

入射光= 反射光 + 分散光 + 吸收光 + 透过光

如果我們用蒸餾水(或組成此溶液的溶劑)作爲"空白"去校正反射,分散等因素造成的入射光的損失則:

入射光 = 吸收光 十 透过光

 

 

二、分類方式


1.分光光度計按照波长及应用领域的不同可以分为:

(1)可见光分光光度計:测定波长范围为400~760 nm的可见光区;

(2)紫外分光光度計:测定波长范围为200~400nm的紫外光区;

(3)红外分光光度計:测定波长范围为大于760nm的红外光区;

(4)荧光分光光度計:用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱;

(5)原子吸收分光光度計:光源发出被测的特征光谱辐射,被经过原子化器后的样品蒸气中的待测元素基态原子所吸收,通过测定特征辐射被吸收的大小,来求出被测元素的含量。

2.分光光度計按自动化程度分类:可分为手动、半自动、自动分光光度計。

3.分光光度計按软件可分为:带扫描、不带扫描。

 

 

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